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技術(shù)文章

如何正確對DNA提取試劑盒進(jìn)行保存和操作?

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  DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。C7H7Cl具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細(xì)胞壁的特性。
 
  DNA提取試劑盒的保存方式:
 
  室溫。低溫保存可能會(huì)有沉淀析出。如果發(fā)生析出現(xiàn)象,請于50℃溶解后,再于室溫保存。
 
  DNA提取試劑盒的操作方法:
 
  全套操作約需1小時(shí),分勻漿、細(xì)胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟,詳細(xì)說明如下。
 
  勻漿和細(xì)胞裂解:
 
  使用不同的實(shí)驗(yàn)材料需采用不同的勻漿步驟,具體說明如下:
 
  【從動(dòng)物組織中提取基因組DNA】
 
  使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí):
 
  ① 取1~100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中,快速用力展研成勻漿。
 
  注)下列組織請加液氮研磨至粉末狀。
 
  A.富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。
 
  B.富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。
 
  C.富含角質(zhì)蛋白的組織或堅(jiān)硬的組織(如骨骼)等。
 
  ② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,溫和研磨30秒鐘。
 
  注)使用上述①-注)的實(shí)驗(yàn)材料時(shí),請?jiān)诩尤隨olution A及RNase A1后,將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。
 
  ③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿液移至Collection Tube中。如果勻漿體積不足650 μl,請補(bǔ)充Solution A至650 μl,65℃保溫5分鐘。
 
  使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí):
 
  ① 取1~100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊狀。
 
  ② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成勻漿。
 
  ③ 加入350 μl的Solution A將研磨棒上的勻漿沖入Collection Tube中,充分振蕩混合后,65℃保溫5分鐘。
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