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技術(shù)文章

ELISA試劑盒的代測(cè)主要有哪幾種方法?

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  ELISA試劑盒運(yùn)用的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反應(yīng),并通過(guò)酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化,將抗原抗體反應(yīng)通過(guò)顏色的辦法顯現(xiàn)出來(lái)。固相吸附蛋白對(duì)錯(cuò)特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面依然有吸附其它蛋白的才華,為了確保抗原抗體反應(yīng)的特異性,因而被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)蛋白封閉,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清代替。酶可以通過(guò)共價(jià)鍵與抗原或抗體銜接構(gòu)成結(jié)合物,當(dāng)抗原抗體反應(yīng)的時(shí)分,被檢測(cè)靶方針中也結(jié)合了酶分子。
 
  ELISA試劑盒的代測(cè)方法:
 
  一、間接法:此測(cè)定辦法與直接法相似,不一樣在于級(jí)抗體沒有酶符號(hào),改用酶符號(hào)的二級(jí)抗體去辨識(shí)一抗體來(lái)測(cè)定抗原量。
 
  優(yōu)勢(shì):二抗能夠加強(qiáng)信號(hào),并且有多種挑選能做不一樣的測(cè)定剖析,不加酶符號(hào)的一抗體則能保存它zui多的免疫反響性。
 
  缺陷:交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
 
  二、直接法:將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號(hào)的一抗體,即可測(cè)定抗原總量,此一抗體的特異性非常重要。
 
  優(yōu)勢(shì):操作手續(xù)簡(jiǎn)略,因無(wú)須運(yùn)用二抗可防止交互反響。
 
  缺陷:實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào),但不是每種抗體都適合做符號(hào),費(fèi)用相對(duì)進(jìn)步。
 
  三、雙抗體夾心法
 
  優(yōu)勢(shì):高活路,高專一性,抗原無(wú)須事前純化。
 
  缺陷:抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體部位。
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